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竞技宝官网官网_毕赤酵母高效表达热稳定性褐藻胶裂解酶及其在生产褐藻寡糖的应用

发布时间:2020-12-21    来源:竞技宝官网官网 36492

竞技宝官网官网 _01句背景概述BACKGROUNDINTRODUCTION海藻酸粘合剂是-D-太和糖酸(M)及其C5次异构体-L-九洛糖酸(G)通过/-1,4糖份结合随机排列的酸性多糖。海藻酸分解酶一般不存在于海水、土壤及海洋藻类中生长的微生物中,而弧菌、假单胞菌、高氮菌、孢菌、朱菌等海洋细菌尤为罕见。少数真菌和病毒也不存在海藻酸分解酶。

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海藻酸分解酶是一种海藻酸海藻酸分解酶,它可以生产具有新分解的不饱和双重结合结构的寡糖产物,而不会用-nin阻止海藻酸海藻酸糖苷糖苷结合。海藻酸分解酶根据基质水解方式分为核苷酸-L-1、4-九糖醛酸分解酶、核苷酸-D-1、4-太和糖醛酸分解酶和两个片段都可以分解的双功能分解酶。研究结果显示,海藻酸水解物海藻酸寡糖在医药、农业、食品等领域具有很大的利用潜力,在抗氧化、抗肿瘤、抗凝剂、抗真菌、神经维持场、消化、吸收、植物生长及保存等方面具有良好的生物活性。

毕赤酵母传递系统具有细胞外蛋白质粘液的强大能力、促进分离、无内毒素分解等优点。该系统通常是工业生产重组蛋白质的选择,但目前还没有关于褐藻分解酶在毕赤酵母系统重组的报道。对毕赤酵母在海藻酸分解酶生产中潜在应用的研究具有很好的研究价值。

2018年,杭州师范大学海防利等在《MarineDrugs》 (IF 2018=4.379,医学第二区)正式公布了“High-Levelexpressionofathermallystablealginates”的标题。“characterizationandapplicationinproducingbrownalginateoligosaccharide”的句子。

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本研究中,对黄菌H63的褐藻酸降解酶基因sagl在毕赤酵母中顺利传递,实现了高产。以前,由于包含问题,sagl基因在大肠杆菌中不能很好地传递。另一方面,该研究对酵母生产的重组助产分解酶的特性进行了详细的研究。此外,利用该重组酶对褐藻酸寡糖的大规模生产进行了研究。

02中使用的主要方法METHODS1.大肠杆菌和毕赤酵母重组传递了。2.SDS-页面;3.Westernblot;4.脱糖基化;5.TLC薄层色谱;6.ESI-MS;7.氨基酸系统发育根建设与分析03句主要内容摘要ABSTRACT本文来源于黄曲霉毒素H63的褐藻分解酶基因sagl,优化密码子后在毕赤酵母中高密度烘焙构建低传递。

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酵母培养中sagl(rSAGL)重组酶的最低产量为226.4 G/ML (915.5U/这是目前为止海藻酸钠分解酶重组传递的最低产量。RSAGL通过ENDO消化被确认为部分糖基化蛋白质。

该酶的最佳反应温度为45,必要条件pH为7.5。在80mMK+浓度下,酶的催化活性可以提高至少244%。

RSAGL为热稳定酶,T5015为57 ~ 58,T5030为53 ~ 54,热稳定性高于未知海藻酸钠分解酶。在PH为6的100毫米磷酸缓冲液中,rSAGL在50孵化2h后保持98.8%的初始活性,在一定温度48h后也能保持61.6%的初始活性。

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通过毕赤酵母精制的rSAGL的特异性可以超过4044 U/MG,这是迄今为止海藻酸钠分解酶的第二低记录。当RSAGL氧化酶需要转化为40G/L的海藻酸钠时,在50下种植32小时后,97.2%的基质可以转化为2、3、4糖。

混合物还原成糖的最终浓度超过9.51G/L。利用毕赤酵母系统温和传递热量的海藻酸分解酶尚属首次。_竞技宝官网官网 。

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